Diabetologia：诱导但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现肝细胞致病到浮现1M-肾病诊疗病因的成效率在儿童初就有不错的描绘，多个肝细胞致病阴性的儿童中所有70%在血清叠加后10年内患上肾病，而随访15年的儿童这一比率减极少到84%。相对于之下，占诊疗1M-肾病一半以上的M-1M-肾病的发作有助于还没有得到充分的研究成果。

愈发多的人开始适用分阶段系统来定义1M-肾病的成效：母形体在浮现多种肝细胞致病时重回第1过渡阶段，浮现摄入量异常时重回第2过渡阶段，浮现病因时重回第3过渡阶段。一些多发肝细胞致病阴性的母形体，在1期和2期，成效较快，并转变为发作的1M-肾病。我们之后描绘了一组成员在首次检测到多种肝细胞致病抽取后至极少10年无肾病的极快成效者，这组成员患儿人数极少，但相似性极为具体。随后，我们发现肝细胞致病选择性CD8+T肝细胞加成在成效减快的患儿中所也就是说不长期存在，但在最近发作和一直长期存在的肾病患儿中所很更易检测到。这确实指出，与成效患儿相对于，这些患儿致病加成的缓冲进一步提高。

早期研究成果指出，尽管缓冲性T肝细胞(Treg)比例正常，但肾病患儿长期存在一些新功能毛病，其中所包括对IL-2的加成能力也减极少。此外，肾病患儿中所的effectCD4+T肝细胞确实对缓冲更具抵抗性，展现为effectT肝细胞的选择性弱化，自然产生的Treg和形体外产生的其会Treg，以及免疫年中的CD4+T肝细胞中所IL-2加成弱化。本研究成果的目的是描绘了CD4+缓冲性T肝细胞(Treg)在一小群极减快成效者中所的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法有：BOX研究成果是一项以这群人为基础的纵向研究成果，在21岁以下确诊的患儿亲族中所检测1M-肾病的险恶因素。我们之后描绘了一直减快成效者的相似性，他们保持多重肝细胞致病阴性超过10年，但没有浮现肾病的诊疗病因，快性或非顺利进行性致病。随后，10名再次保持无肾病并愿意提供大量血液抽取的减快成效者纳入T和B肝细胞新功能深入研究。在现今的研究成果中所，8名快成效者(SP组成员)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的肝细胞致病阴性。所有的举例来说都始终保持1M-肾病成效的1期，尽管一些人随后保住了肝细胞致病对某些免疫的阴性加成，然而，一名患儿已经始终保持2期至极少6年，但没有浮现诊疗病因，一名患儿被诊断为肾病，该人脑72岁，在采集试验中抽取时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究中所对该供形体顺利进行了单独审核。除去外周血单个核肝细胞(PBMCs)，运用于多参数流式肝细胞妖术和T肝细胞选择性试验审核供形体中所Treg的kHz、表M-和新功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类检验、表征和回归)顺利进行无都由聚类深入研究，审核Treg表M-。

结果：与健康供形体相对于，来自快成效形体的无意识CD4+T肝细胞的都由聚类推测，作用于的无意识CD4+ TregkHz减极少，与糖皮质激素其会的TNFR涉及细胞(GITR)表达显露来减极少有关。一名HbA1c升高的患儿与成效减快者和意味着的相比较组成员相对于，Treg谱有所不同。新功能推断，与健康供形体相对于，来自减快成效形体的Treg抑制的CD4+effectT肝细胞选择性相比受损。展现为对effectCD4+T肝细胞CD25和CD134表达显露来的选择性减极少。

示意图1 深入的表M-深入研究推测，CD4+Treg亚M-在快成效链表中所减极少。由FlowSOM生成的Treg房，组织起来在来自所有供形体的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标示显露物表达显露来检验显露10个元簇:无意识T肝细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞;线程Treg_1;线程Treg_2;线程Treg_3;和线程Treg_4。(a)适用9个不同Treg标示显露生成的10个元簇的MST。每个数据流代表一个坦克部队(100个坦克部队)，更大的元坦克部队(10个元坦克部队)在数据流组成员周围制做。每个数据流中所的饼示意图暗示单个标示显露的表达显露来级别。(b)每个元聚类的热示意图，以推测整形体标示显露表达显露来。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)生成示意图，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对原长子量为每个metacluster木箱终点站示意图(原长子量> 0.05%)确认为HD和SP组成员:线程Treg_2 (e),线程Treg_3 (f),线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T肝细胞(l)。浅蓝色格长子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon分组成员符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 适用CITRUS的预测模M-证实，TregkHz的减极少是成效减快的标志。分级奈斯(a - f)和柑橘深入研究(g-k)比较SP举例来说和意味着的HD举例来说在CD4+CD45RA−T肝细胞上的不同。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的纪念性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3氟化物，然后通过HLA-DR和GITR表达显露来顺利进行除去，模拟FlowSOM群形体。(b) HD(黑点)和SP(斑点)组成员以及供形体SP 606(浅蓝色)中所CD25+ cd127的kHz统计示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯长子集的木箱终点站示意图;(c) HLA-DRloGITR−(线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线程T cell)。(g - i)木瓜簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达显露来强度填充，箭头突显露的簇被标识为SP和HD链表间的不同。(j)木箱终点站示意图推测了在SP(斑点)和HD(灰点)组成员中所，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对原长子量(比率)。(k)直方示意图推测每个簇的表M-(粉红色)和Treg标示显露相对表达显露来与背景表达显露来(浅蓝色);上列，线程Treg_3;请注意一行，线程Treg_4。背景与所有其他簇中所标示显露的表达显露来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon分组成员符号秩检验

示意图3 与健康献血者相对于，成效减快者无意识treg的GITR减极少。每个无意识CD4+T肝细胞元簇(无意识T肝细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞;线程Treg_2;线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个表达显露来标示显露的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的表达显露来热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中所所有HD(黑色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR表达显露来并联，推测直方示意图(c)和统计示意图(d)。Wilcoxon分组成员符号秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有供形体包括，p< 0.05(浅蓝色)供形体SP 606和意味着的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR表达显露来，从分级奈斯，从所有HD(黑色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(浅蓝色)并联，推测直方示意图(e)和统计示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon分组成员符号秩检验

示意图4 来自减快成效的CD4+ treg肝细胞掌控effectCD4+T肝细胞的能力也减极少。SP组成员用浅蓝色的终点站和格长子暗示，HD组成员用黑色的终点站和格长子暗示，浅蓝色的终点站/格长子暗示供形体sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标示显露为CFSE, Treg按观察的比率起始。用抗CD3 /28微珠作用于肝细胞，指导3同月顺利进行流式肝细胞妖术检测。(a-d)与CD4+需要的话者相对应的treg指导(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者指导。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE选择性百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性百分比。适用阴性相比较(作用于的响应肝细胞包含treg)计算选择性百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 effectCD4+T肝细胞对减快成效的T肝细胞作用于的选择性更极端。SP组成员用浅蓝色的终点站和格长子暗示，HD组成员用黑色的终点站和格长子暗示，浅蓝色的终点站/格长子暗示供形体sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标示显露，treg按观察的比率起始。用抗CD3 /28微珠作用于肝细胞，指导3同月顺利进行流式肝细胞妖术(CD25反染)和肝STAT深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者携手指导。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE选择性百分率(b)。(c,d) CD25选择性百分率(c)和CD134选择性百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在指导显露来中所的表达显露来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

假设：我们给显露的假设是，来自减快成效长子的作用于无意识CD4+Treg在GITR表达显露来中所得到了扩展和丰沛，强调了进一步研究成果Treg在1M-肾病风险母形体中所的异质性的必要性。

原文显露处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28